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L'établissement de modèles animaux de changement modique (MC) constitue une base importante pour l'étude du MC. Cinquante-quatre lapins blancs de Nouvelle-Zélande ont été divisés en groupe d'opération fictive, groupe d'implantation musculaire (groupe ME) et groupe d'implantation du noyau pulpeux (groupe NPE). Dans le groupe NPE, le disque intervertébral a été exposé par approche chirurgicale lombaire antérolatérale et une aiguille a été utilisée pour percer le corps vertébral L5 près du plateau vertébral. Le NP a été extrait du disque intervertébral L1/2 à l'aide d'une seringue et y a été injecté. Percer un trou dans l'os sous-chondral. Les procédures chirurgicales et les méthodes de forage dans le groupe d'implantation musculaire et dans le groupe d'opération simulée étaient les mêmes que celles du groupe d'implantation NP. Dans le groupe ME, un morceau de muscle a été placé dans le trou, tandis que dans le groupe d'opération fictive, rien n'a été placé dans le trou. Après l’opération, une IRM et des tests de biologie moléculaire ont été réalisés. Le signal dans le groupe NPE a changé, mais il n'y a eu aucun changement de signal évident dans le groupe d'opération simulée et dans le groupe ME. L'observation histologique a montré qu'une prolifération tissulaire anormale a été observée au site d'implantation et que l'expression de l'IL-4, de l'IL-17 et de l'IFN-γ a été augmentée dans le groupe NPE. L'implantation de NP dans l'os sous-chondral peut former un modèle animal de MC.
Les changements modiques (MC) sont des lésions des plateaux vertébraux et de la moelle osseuse adjacente visibles en imagerie par résonance magnétique (IRM). Ils sont assez fréquents chez les individus présentant des symptômes associés1. De nombreuses études ont souligné l'importance de la MC en raison de son association avec les lombalgies (LBP)2,3. de Roos et al.4 et Modic et al.5 ont décrit indépendamment pour la première fois trois types différents d'anomalies du signal sous-chondral dans la moelle osseuse vertébrale. Les modifications modiques de type I sont hypointenses sur les séquences pondérées T1 (T1W) et hyperintenses sur les séquences pondérées T2 (T2W). Cette lésion révèle les plateaux verticaux des fissures et le tissu de granulation vasculaire adjacent dans la moelle osseuse. Les modifications Modic de type II montrent un signal élevé sur les séquences T1W et T2W. Dans ce type de lésion, on peut retrouver une destruction des plateaux vertébraux, ainsi qu'un remplacement graisseux histologique de la moelle osseuse adjacente. Les modifications Modic de type III montrent un signal faible dans les séquences T1W et T2W. Des lésions sclérotiques correspondant aux plateaux vertébraux ont été observées6. La MC est considérée comme une maladie pathologique de la colonne vertébrale et est étroitement associée à de nombreuses maladies dégénératives de la colonne vertébrale7,8,9.
Compte tenu des données disponibles, plusieurs études ont fourni des informations détaillées sur l'étiologie et les mécanismes pathologiques de la MC. Albert et coll. suggéré que la MC pourrait être causée par une hernie discale8. Hu et coll. attribué la MC à une grave dégénérescence discale10. Kroc a proposé le concept de « rupture interne du disque », selon lequel des traumatismes discaux répétitifs peuvent entraîner des microdéchirures du plateau vertébral. Après la formation d'une fente, la destruction des plateaux vertébraux par le noyau pulpeux (NP) peut déclencher une réponse auto-immune, ce qui conduit en outre au développement de MC11. Ma et coll. partageaient un point de vue similaire et rapportaient que l'auto-immunité induite par la NP jouait un rôle clé dans la pathogenèse de MC12.
Les cellules du système immunitaire, en particulier les lymphocytes T auxiliaires CD4+, jouent un rôle essentiel dans la pathogenèse de l'auto-immunité13. Le sous-ensemble Th17 récemment découvert produit la cytokine pro-inflammatoire IL-17, favorise l'expression de la chimiokine et stimule les cellules T des organes endommagés à produire de l'IFN-γ14. Les cellules Th2 jouent également un rôle unique dans la pathogenèse des réponses immunitaires. L'expression de l'IL-4 en tant que cellule Th2 représentative peut entraîner de graves conséquences immunopathologiques15.
Bien que de nombreuses études cliniques aient été menées sur les MC16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, il existe encore un manque de modèles expérimentaux animaux appropriés capables d'imiter le processus MC qui se produit fréquemment chez l'homme et qui peut être utilisé pour étudier l’étiologie ou de nouveaux traitements tels qu’une thérapie ciblée. À ce jour, seuls quelques modèles animaux de MC ont étudié les mécanismes pathologiques sous-jacents.
Basée sur la théorie auto-immune proposée par Albert et Ma, cette étude a établi un modèle MC de lapin simple et reproductible en autotransplantant du NP près de la plaque terminale vertébrale percée. D'autres objectifs sont d'observer les caractéristiques histologiques des modèles animaux et d'évaluer les mécanismes spécifiques de la NP dans le développement de la MC. À cette fin, nous utilisons des techniques telles que la biologie moléculaire, l'IRM et les études histologiques pour étudier la progression de la MC.
Deux lapins sont morts de saignements pendant l'intervention chirurgicale et quatre lapins sont morts pendant l'anesthésie pendant l'IRM. Les 48 lapins restants ont survécu et n’ont présenté aucun signe comportemental ou neurologique après l’opération.
L'IRM montre que l'intensité du signal des tissus incrustés dans différents trous est différente. L'intensité du signal du corps vertébral L5 dans le groupe NPE a progressivement changé 12, 16 et 20 semaines après l'insertion (la séquence T1W montrait un signal faible et la séquence T2 montrait un signal mixte plus un signal faible) (Fig. 1C), tandis que les apparences IRM des deux autres groupes de pièces encastrées sont restés relativement stables au cours de la même période (Fig. 1A, B).
(A) IRM séquentielles représentatives de la colonne lombaire du lapin à 3 moments. Aucune anomalie de signal n’a été trouvée dans les images du groupe d’opération fictive. (B) Les caractéristiques du signal du corps vertébral dans le groupe ME sont similaires à celles du groupe opération simulée, et aucun changement de signal significatif n’est observé au site d’intégration au fil du temps. (C) Dans le groupe NPE, le signal faible est clairement visible dans la séquence T1W, et le signal mixte et le signal faible sont clairement visibles dans la séquence T2W. De la période de 12 semaines à la période de 20 semaines, les signaux hauts sporadiques entourant les signaux faibles dans la séquence T2W diminuent.
Une hyperplasie osseuse évidente peut être observée au site d'implantation du corps vertébral dans le groupe NPE, et l'hyperplasie osseuse se produit plus rapidement de 12 à 20 semaines (Fig. 2C) par rapport au groupe NPE, aucun changement significatif n'est observé dans le modèle vertébral. corps; Groupe fictif et groupe ME (Fig. 2C) 2A, B).
(A) La surface du corps vertébral au niveau de la partie implantée est très lisse, le trou guérit bien et il n’y a pas d’hyperplasie dans le corps vertébral. (B) La forme du site implanté dans le groupe ME est similaire à celle du groupe opération fictive, et il n’y a pas de changement évident dans l’apparence du site implanté au fil du temps. (C) Une hyperplasie osseuse s'est produite au niveau du site implanté dans le groupe NPE. L'hyperplasie osseuse a augmenté rapidement et s'est même étendue à travers le disque intervertébral jusqu'au corps vertébral controlatéral.
L'analyse histologique fournit des informations plus détaillées sur la formation osseuse. La figure 3 montre les photographies des coupes postopératoires colorées au H&E. Dans le groupe d'opération fictive, les chondrocytes étaient bien disposés et aucune prolifération cellulaire n'a été détectée (Fig. 3A). La situation dans le groupe ME était similaire à celle du groupe opération fictive (Fig. 3B). Cependant, dans le groupe NPE, un grand nombre de chondrocytes et une prolifération de cellules de type NP ont été observés au site d'implantation (Fig. 3C) ;
(A) Des trabécules peuvent être vues près de la plaque terminale, les chondrocytes sont soigneusement disposés avec une taille et une forme de cellules uniformes et aucune prolifération (40 fois). (B) L’état du site d’implantation dans le groupe ME est similaire à celui du groupe factice. Des trabécules et des chondrocytes sont visibles, mais il n'y a pas de prolifération évidente au site d'implantation (40 fois). (B) On peut voir que les chondrocytes et les cellules de type NP prolifèrent de manière significative et que la forme et la taille des chondrocytes sont inégales (40 fois).
L'expression de l'ARNm de l'interleukine 4 (IL-4), de l'ARNm de l'interleukine 17 (IL-17) et de l'ARNm de l'interféron γ (IFN-γ) a été observée dans les groupes NPE et ME. Lorsque les niveaux d'expression des gènes cibles ont été comparés, les expressions géniques de l'IL-4, de l'IL-17 et de l'IFN-γ étaient significativement augmentées dans le groupe NPE par rapport à celles du groupe ME et du groupe d'opération fictive (Fig. 4). (P < 0,05). Par rapport au groupe d'opération simulée, les niveaux d'expression d'IL-4, d'IL-17 et d'IFN-γ dans le groupe ME n'ont augmenté que légèrement et n'ont pas atteint de changement statistique (P > 0,05).
L'expression de l'ARNm de l'IL-4, de l'IL-17 et de l'IFN-γ dans le groupe NPE a montré une tendance significativement plus élevée que celle du groupe des opérations fictives et du groupe ME (P < 0,05).
En revanche, les niveaux d'expression dans le groupe ME n'ont montré aucune différence significative (P > 0,05).
L'analyse par transfert Western a été réalisée à l'aide d'anticorps disponibles dans le commerce contre l'IL-4 et l'IL-17 pour confirmer le modèle d'expression modifié de l'ARNm. Comme le montrent les figures 5A, B, par rapport au groupe ME et au groupe d'opération fictive, les niveaux de protéines d'IL-4 et d'IL-17 dans le groupe NPE ont été significativement augmentés (P < 0,05). Par rapport au groupe d'opération fictive, les niveaux de protéines d'IL-4 et d'IL-17 dans le groupe ME n'ont pas non plus atteint de changements statistiquement significatifs (P > 0,05).
(A) Les niveaux de protéines d'IL-4 et d'IL-17 dans le groupe NPE étaient significativement plus élevés que ceux du groupe ME et du groupe placebo (P < 0,05). (B) Histogramme de transfert Western.
En raison du nombre limité d’échantillons humains obtenus lors d’une intervention chirurgicale, des études claires et détaillées sur la pathogenèse de la MC sont quelque peu difficiles. Nous avons tenté d'établir un modèle animal de MC pour étudier ses mécanismes pathologiques potentiels. Parallèlement, une évaluation radiologique, une évaluation histologique et une évaluation biologique moléculaire ont été utilisées pour suivre l'évolution de la MC induite par autogreffe de NP. En conséquence, le modèle d'implantation NP a entraîné un changement progressif de l'intensité du signal de 12 semaines à 20 semaines (signal faible mixte dans les séquences T1 et signal faible dans les séquences T2), indiquant des changements tissulaires et les paramètres histologiques et moléculaires. les évaluations biologiques ont confirmé les résultats de l'étude radiologique.
Les résultats de cette expérience montrent que des changements visuels et histologiques se sont produits au niveau du site d'atteinte du corps vertébral dans le groupe NPE. Dans le même temps, l'expression des gènes IL-4, IL-17 et IFN-γ, ainsi que de l'IL-4, de l'IL-17 et de l'IFN-γ, a été observée, indiquant que la violation du tissu autologue du noyau pulpeux dans la région vertébrale. le corps peut provoquer une série de changements de signaux et morphologiques. Il est facile de constater que les caractéristiques du signal des corps vertébraux du modèle animal (signal faible dans la séquence T1W, signal mixte et signal faible dans la séquence T2) sont très similaires à celles des cellules vertébrales humaines, et les caractéristiques IRM également. confirmer les observations d'histologie et d'anatomie globale, c'est-à-dire que les changements dans les cellules du corps vertébral sont progressifs. Bien que la réponse inflammatoire provoquée par un traumatisme aigu puisse apparaître peu de temps après la ponction, les résultats de l'IRM ont montré que des changements de signal progressivement croissants apparaissaient 12 semaines après la ponction et persistaient jusqu'à 20 semaines sans aucun signe de récupération ou d'inversion des modifications de l'IRM. Ces résultats suggèrent que la NP vertébrale autologue est une méthode fiable pour établir une VM progressive chez le lapin.
Ce modèle de ponction nécessite des compétences, du temps et un effort chirurgical adéquats. Lors d'expériences préliminaires, une dissection ou une stimulation excessive des structures ligamentaires paravertébrales peuvent entraîner la formation d'ostéophytes vertébraux. Il faut veiller à ne pas endommager ou irriter les disques adjacents. La profondeur de pénétration devant être contrôlée pour obtenir des résultats cohérents et reproductibles, nous avons réalisé manuellement un bouchon en coupant la gaine d’une aiguille de 3 mm de long. L'utilisation de ce bouchon garantit une profondeur de forage uniforme dans le corps vertébral. Lors d'expériences préliminaires, trois chirurgiens orthopédistes impliqués dans l'opération ont découvert que les aiguilles de calibre 16 étaient plus faciles à utiliser que les aiguilles de calibre 18 ou d'autres méthodes. Pour éviter un saignement excessif pendant le forage, maintenir l'aiguille immobile pendant un certain temps fournira un trou d'insertion plus approprié, ce qui suggère qu'un certain degré de MC peut être contrôlé de cette manière.
Bien que de nombreuses études aient ciblé la MC, on sait peu de choses sur l’étiologie et la pathogenèse de la MC25,26,27. Sur la base de nos études précédentes, nous avons constaté que l'auto-immunité joue un rôle clé dans l'apparition et le développement du MC12. Cette étude a examiné l'expression quantitative de l'IL-4, de l'IL-17 et de l'IFN-γ, qui sont les principales voies de différenciation des cellules CD4+ après stimulation antigénique. Dans notre étude, par rapport au groupe négatif, le groupe NPE présentait une expression plus élevée d'IL-4, d'IL-17 et d'IFN-γ, et les niveaux de protéines d'IL-4 et d'IL-17 étaient également plus élevés.
Cliniquement, l’expression de l’ARNm de l’IL-17 est augmentée dans les cellules NP provenant de patients présentant une hernie discale28. Des niveaux d'expression accrus d'IL-4 et d'IFN-γ ont également été observés dans un modèle de hernie discale aiguë non compressive par rapport à des témoins sains29. L'IL-17 joue un rôle clé dans l'inflammation et les lésions tissulaires dans les maladies auto-immunes30 et améliore la réponse immunitaire à l'IFN-γ31. Des lésions tissulaires accrues médiées par l'IL-17 ont été rapportées chez des souris MRL/lpr32 et des souris sensibles à l'auto-immunité33. L'IL-4 peut inhiber l'expression de cytokines pro-inflammatoires (telles que l'IL-1β et le TNFα) et l'activation des macrophages34. Il a été rapporté que l'expression de l'ARNm de l'IL-4 était différente dans le groupe NPE par rapport à l'IL-17 et à l'IFN-γ au même moment ; L'expression de l'ARNm de l'IFN-γ dans le groupe NPE était significativement supérieure à celle des autres groupes. Par conséquent, la production d’IFN-γ pourrait être un médiateur de la réponse inflammatoire induite par l’intercalation des NP. Des études ont montré que l'IFN-γ est produit par plusieurs types de cellules, notamment les cellules T auxiliaires activées de type 1, les cellules tueuses naturelles et les macrophages, et constitue une cytokine pro-inflammatoire clé qui favorise les réponses immunitaires.
Cette étude suggère que la réponse auto-immune pourrait être impliquée dans l'apparition et le développement de la MC. Luoma et coll. ont découvert que les caractéristiques du signal de MC et de NP proéminentes sont similaires en IRM et que les deux présentent un signal élevé dans la séquence T2W38. Il a été confirmé que certaines cytokines sont étroitement associées à l'apparition de MC, comme l'IL-139. Ma et coll. suggéré que la saillie vers le haut ou vers le bas de NP pourrait avoir une grande influence sur l'apparition et le développement de MC12. Bobechko40 et Herzbein et al.41 ont rapporté que la NP est un tissu immunotolérant qui ne peut pas pénétrer dans la circulation vasculaire dès la naissance. Les protubérances NP introduisent des corps étrangers dans l’approvisionnement en sang, médiant ainsi les réactions auto-immunes locales42. Les réactions auto-immunes peuvent induire un grand nombre de facteurs immunitaires et, lorsque ces facteurs sont continuellement exposés aux tissus, ils peuvent provoquer des modifications de la signalisation43. Dans cette étude, la surexpression de l’IL-4, de l’IL-17 et de l’IFN-γ sont des facteurs immunitaires typiques, prouvant ainsi la relation étroite entre NP et MC44. Ce modèle animal imite bien la percée du NP et son entrée dans la plaque terminale. Ce processus a en outre révélé l’impact de l’auto-immunité sur MC.
Comme prévu, ce modèle animal nous fournit une plate-forme possible pour étudier la MC. Cependant, ce modèle présente encore certaines limites : premièrement, pendant la phase d’observation des animaux, certains lapins de stade intermédiaire doivent être euthanasiés pour des tests histologiques et de biologie moléculaire, de sorte que certains animaux « tombent hors d’usage » avec le temps. Deuxièmement, bien que trois points temporels soient définis dans cette étude, nous n'avons malheureusement modélisé qu'un seul type de MC (changement Modic de type I), ce qui ne suffit donc pas pour représenter le processus de développement de la maladie humaine, et davantage de points temporels doivent être définis pour mieux observer tous les changements de signal. Troisièmement, les changements dans la structure tissulaire peuvent en effet être clairement mis en évidence par la coloration histologique, mais certaines techniques spécialisées peuvent mieux révéler les changements microstructuraux dans ce modèle. Par exemple, la microscopie à lumière polarisée a été utilisée pour analyser la formation de fibrocartilage dans les disques intervertébraux de lapin45. Les effets à long terme du NP sur la MC et le plateau vertébral nécessitent une étude plus approfondie.
Cinquante-quatre lapins blancs mâles de Nouvelle-Zélande (poids d'environ 2,5 à 3 kg, âgés de 3 à 3,5 mois) ont été répartis au hasard en groupe d'opération fictive, groupe d'implantation musculaire (groupe ME) et groupe d'implantation de racines nerveuses (groupe NPE). Toutes les procédures expérimentales ont été approuvées par le comité d'éthique de l'hôpital de Tianjin et les méthodes expérimentales ont été réalisées en stricte conformité avec les directives approuvées.
Certaines améliorations ont été apportées à la technique chirurgicale de S. Sobajima 46 . Chaque lapin a été placé en position de décubitus latéral et la surface antérieure de cinq disques intervertébraux lombaires (DIV) consécutifs a été exposée à l'aide d'une approche rétropéritonéale postérolatérale. Chaque lapin a reçu une anesthésie générale (20 % d'uréthane, 5 ml/kg via la veine de l'oreille). Une incision cutanée longitudinale a été pratiquée du bord inférieur des côtes jusqu'au bord pelvien, à 2 cm ventrale des muscles paravertébraux. La colonne antérolatérale droite de L1 à L6 a été exposée par dissection nette et franche du tissu sous-cutané sus-jacent, du tissu rétropéritonéal et des muscles (Fig. 6A). Le niveau discal a été déterminé en utilisant le bord pelvien comme repère anatomique pour le niveau discal L5-L6. Utilisez une aiguille de ponction de calibre 16 pour percer un trou près de la plaque d'extrémité de la vertèbre L5 jusqu'à une profondeur de 3 mm (Fig. 6B). Utilisez une seringue de 5 ml pour aspirer le noyau pulpeux autologue dans le disque intervertébral L1-L2 (Fig. 6C). Retirez le noyau pulpeux ou le muscle selon les besoins de chaque groupe. Une fois le trou de forage approfondi, des sutures résorbables sont placées sur le fascia profond, le fascia superficiel et la peau, en prenant soin de ne pas endommager le tissu périosté du corps vertébral pendant l'intervention chirurgicale.
(A) Le disque L5 – L6 est exposé via une approche rétropéritonéale postérolatérale. (B) Utilisez une aiguille de calibre 16 pour percer un trou près de la plaque d'extrémité L5. (C) Les MF autologues sont récoltés.
Une anesthésie générale a été administrée avec 20 % d'uréthane (5 ml/kg) administrée via la veine de l'oreille, et des radiographies de la colonne lombaire ont été répétées à 12, 16 et 20 semaines après l'opération.
Les lapins ont été sacrifiés par injection intramusculaire de kétamine (25,0 mg/kg) et de pentobarbital sodique intraveineux (1,2 g/kg) 12, 16 et 20 semaines après l'intervention chirurgicale. La colonne vertébrale entière a été retirée pour analyse histologique et une véritable analyse a été réalisée. La transcription inverse quantitative (RT-qPCR) et le Western blot ont été utilisés pour détecter les modifications des facteurs immunitaires.
Des examens IRM ont été réalisés chez des lapins à l'aide d'un aimant clinique de 3,0 T (GE Medical Systems, Florence, SC) équipé d'un récepteur à bobine orthogonale de membre. Les lapins ont été anesthésiés avec 20 % d'uréthane (5 ml/kg) via la veine de l'oreille, puis placés en décubitus dorsal dans l'aimant, la région lombaire étant centrée sur une bobine à surface circulaire de 5 pouces de diamètre (GE Medical Systems). Des images coronales de localisation pondérées en T2 (TR, 1445 ms ; TE, 37 ms) ont été acquises pour définir l'emplacement du disque lombaire de L3-L4 à L5-L6. Des coupes pondérées T2 dans le plan sagittal ont été acquises avec les paramètres suivants : séquence d'écho de spin rapide avec un temps de répétition (TR) de 2 200 ms et un temps d'écho (TE) de 70 ms, matrice ; champ visuel de 260 et huit stimuli ; L'épaisseur de coupe était de 2 mm, l'écart était de 0,2 mm.
Après que la dernière photographie a été prise et que le dernier lapin a été tué, les disques factices, incrustés dans les muscles et NP ont été retirés pour examen histologique. Les tissus ont été fixés dans du formol tamponné neutre à 10 % pendant 1 semaine, décalcifiés avec de l'acide éthylènediaminetétraacétique et sectionnés en paraffine. Les blocs de tissus ont été inclus dans de la paraffine et découpés en coupes sagittales (5 µm d'épaisseur) à l'aide d'un microtome. Les coupes ont été colorées à l'hématoxyline et à l'éosine (H&E).
Après avoir collecté les disques intervertébraux des lapins de chaque groupe, l'ARN total a été extrait à l'aide d'une colonne UNIQ-10 (Shanghai Sangon Biotechnology Co., Ltd., Chine) conformément aux instructions du fabricant et d'un système de transcription inverse ImProm II (Promega Inc. , Madison, WI, États-Unis). Une transcription inverse a été réalisée.
La RT-qPCR a été réalisée à l'aide d'un Prism 7300 (Applied Biosystems Inc., USA) et d'un SYBR Green Jump Start Taq ReadyMix (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) conformément aux instructions du fabricant. Le volume de la réaction PCR était de 20 µl et contenait 1,5 µl d'ADNc dilué et 0,2 µM de chaque amorce. Les amorces ont été conçues par OligoPerfect Designer (Invitrogen, Valencia, Californie) et fabriquées par Nanjing Golden Stewart Biotechnology Co., Ltd. (Chine) (Tableau 1). Les conditions de cycles thermiques suivantes ont été utilisées : étape initiale d'activation de la polymérase à 94 ° C pendant 2 min, puis 40 cycles de 15 s chacun à 94 ° C pour la dénaturation de la matrice, recuit pendant 1 min à 60 ° C, extension et fluorescence. les mesures ont été effectuées pendant 1 min à 72°C. Tous les échantillons ont été amplifiés trois fois et la valeur moyenne a été utilisée pour l'analyse RT-qPCR. Les données d'amplification ont été analysées à l'aide de FlexStation 3 (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, USA). L'expression des gènes IL-4, IL-17 et IFN-γ a été normalisée par rapport au contrôle endogène (ACTB). Les niveaux d'expression relatifs de l'ARNm cible ont été calculés à l'aide de la méthode 2-ΔΔCT.
La protéine totale a été extraite des tissus à l'aide d'un homogénéisateur tissulaire dans un tampon de lyse RIPA (contenant un cocktail d'inhibiteurs de protéase et de phosphatase), puis centrifugée à 13 000 tr/min pendant 20 min à 4 °C pour éliminer les débris tissulaires. Cinquante microgrammes de protéines ont été chargés par piste, séparés par SDS-PAGE à 10 %, puis transférés sur une membrane PVDF. Le blocage a été réalisé dans du lait écrémé en poudre à 5 % dans une solution saline tamponnée au Tris (TBS) contenant 0,1 % de Tween 20 pendant 1 h à température ambiante. La membrane a été incubée avec un anticorps primaire anti-décorine de lapin (dilué au 1:200 ; Boster, Wuhan, Chine) (dilué au 1 :200 ; Bioss, Pékin, Chine) pendant une nuit à 4 ° C et a réagi le deuxième jour; avec un anticorps secondaire (immunoglobuline G de chèvre anti-lapin à une dilution de 1 : 40 000) associé à de la peroxydase de raifort (Boster, Wuhan, Chine) pendant 1 heure à température ambiante. Les signaux de Western blot ont été détectés par une chimioluminescence accrue sur la membrane chimioluminescente après irradiation aux rayons X. Pour l'analyse densitométrique, les transferts ont été numérisés et quantifiés à l'aide du logiciel BandScan et les résultats ont été exprimés sous la forme du rapport entre l'immunoréactivité du gène cible et l'immunoréactivité de la tubuline.
Les calculs statistiques ont été effectués à l'aide du progiciel SPSS16.0 (SPSS, USA). Les données collectées au cours de l'étude ont été exprimées sous forme de moyenne ± écart type (moyenne ± écart-type) et analysées à l'aide d'une analyse de variance à mesures répétées unidirectionnelles (ANOVA) pour déterminer les différences entre les deux groupes. P <0,05 était considéré comme statistiquement significatif.
Ainsi, l'établissement d'un modèle animal de MC en implantant des NP autologues dans le corps vertébral et en effectuant des observations macroanatomiques, des analyses IRM, des évaluations histologiques et des analyses de biologie moléculaire peut devenir un outil important pour évaluer et comprendre les mécanismes de la MC humaine et développer de nouvelles thérapies. interventions.
Comment citer cet article : Han, C. et al. Un modèle animal des modifications de Modic a été établi en implantant un noyau pulpeux autologue dans l'os sous-chondral de la colonne lombaire. Sci. Rep.6, 35102 : 10.1038/srep35102 (2016).
Weishaupt, D., Zanetti, M., Hodler, J. et Boos, N. Imagerie par résonance magnétique de la colonne lombaire : prévalence de la hernie discale et de la rétention, de la compression des racines nerveuses, des anomalies des plaques terminales et de l'arthrose des facettes articulaires chez des volontaires asymptomatiques . taux. Radiologie 209, 661-666, est ce que je:10.1148/radiology.209.3.9844656 (1998).
Kjaer, P., Korsholm, L., Bendix, T., Sorensen, JS et Leboeuf-Eed, K. Modifications de Modic et leur relation avec les résultats cliniques. European Spine Journal : publication officielle de la European Spine Society, de la Société européenne de déformation de la colonne vertébrale et de la Société européenne pour la recherche sur la colonne cervicale 15, 1312-1319, doi : 10.1007/s00586-006-0185-x (2006).
Kuisma, M., et coll. Modifications modérées des plateaux vertébraux lombaires : prévalence et association avec les lombalgies et la sciatique chez les travailleurs masculins d'âge moyen. Colonne vertébrale 32, 1116-1122, est ce que je:10.1097/01.brs.0000261561.12944.ff (2007).
de Roos, A., Kressel, H., Spritzer, K. et Dalinka, M. IRM des modifications de la moelle osseuse près de la plaque terminale dans une maladie dégénérative de la colonne lombaire. AJR. Journal américain de radiologie 149, 531-534, doi : 10.2214/ajr.149.3.531 (1987).
Modic, MT, Steinberg, PM, Ross, JS, Masaryk, TJ et Carter, JR Discopathie dégénérative : évaluation des modifications de la moelle vertébrale par IRM. Radiologie 166, 193-199, est ce que je:10.1148/radiology.166.1.3336678 (1988).
Modic, MT, Masaryk, TJ, Ross, JS et Carter, JR Imagerie de la discopathie dégénérative. Radiologie 168, 177-186, doi : 10.1148/radiology.168.1.3289089 (1988).
Jensen, TS et coll. Les prédicteurs des changements de signal du plateau vertébral néovertébral (Modic) dans la population générale. European Spine Journal : Publication officielle de la European Spine Society, de la Société européenne de déformation de la colonne vertébrale et de la Société européenne pour la recherche sur la colonne cervicale, Division 19, 129-135, doi : 10.1007/s00586-009-1184-5 (2010).
Albert, HB et Mannisch, K. Modic change après une hernie discale lombaire. European Spine Journal : Publication officielle de la European Spine Society, de la Société européenne de déformation de la colonne vertébrale et de la Société européenne pour la recherche sur la colonne cervicale 16, 977-982, doi : 10.1007/s00586-007-0336-8 (2007).
Kerttula, L., Luoma, K., Vehmas, T., Gronblad, M. et Kaapa, E. Les changements Modic de type I peuvent prédire une dégénérescence discale déformationnelle rapidement progressive : une étude prospective d'un an. European Spine Journal 21, 1135-1142, doi : 10.1007/s00586-012-2147-9 (2012).
Modifications de Hu, ZJ, Zhao, FD, Fang, XQ et Fan, SW Modic : causes possibles et contribution à la dégénérescence du disque lombaire. Hypothèses médicales 73, 930-932, doi : 10.1016/j.mehy.2009.06.038 (2009).
Krok, HV Rupture discale interne. Problèmes de prolapsus discal sur 50 ans. Colonne vertébrale (Phila Pa 1976) 11, 650-653 (1986).
Heure de publication : 13 décembre 2024