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L'établissement de modèles animaux de changement modique (MC) est une base importante pour étudier le MC. Cinquante-quatre lapins blancs néo-zélandais ont été divisés en groupe de simulation, groupe d'implantation musculaire (groupe ME) et groupe d'implantation de Nucleus Pulposus (groupe NPE). Dans le groupe NPE, le disque intervertébral a été exposé par une approche chirurgicale lombaire antérolatérale et une aiguille a été utilisée pour percer le corps vertébral L5 près de la plaque d'extrémité. Le NP a été extrait du disque intervertébral L1 / 2 par une seringue et y injecté. Forage d'un trou dans l'os sous-chondral. Les procédures chirurgicales et les méthodes de forage dans le groupe d'implantation musculaire et le groupe des opérations fictives étaient les mêmes que celles du groupe d'implantation NP. Dans le groupe ME, un morceau de muscle a été placé dans le trou, tandis que dans le groupe de simulation, rien n'a été placé dans le trou. Après l'opération, la numérisation IRM et les tests biologiques moléculaires ont été effectués. Le signal dans le groupe NPE a changé, mais il n'y a pas eu de changement de signal évident dans le groupe de simulations et le groupe ME. L'observation histologique a montré que la prolifération des tissus anormaux a été observée au site d'implantation, et l'expression d'IL-4, d'IL-17 et d'IFN-γ a augmenté dans le groupe NPE. L'implantation de NP dans l'os sous-chondral peut former un modèle animal de MC.
Les changements modiques (MC) sont des lésions des plaques d'extrémité vertébrales et de la moelle osseuse adjacente visible sur l'imagerie par résonance magnétique (IRM). Ils sont assez courants chez les personnes présentant des symptômes associés1. De nombreuses études ont souligné l'importance de MC en raison de son association avec des douleurs lombaires (LBP) 2,3. De Roos et al.4 et Modic et al.5 ont décrit indépendamment trois types différents d'anomalies du signal sous-chondral dans la moelle osseuse vertébrale. Les changements de type I Modic sont hypointenses sur les séquences pondérées en T1 (T1W) et hyperintenses sur les séquences pondérées en T2 (T2W). Cette lésion révèle des plaques de fin de fissure et du tissu de granulation vasculaire adjacent dans la moelle osseuse. Les changements de type II Modic montrent un signal élevé sur les séquences T1W et T2W. Dans ce type de lésion, une destruction de la plaque de terminaison peut être trouvée, ainsi que le remplacement gras histologique de la moelle osseuse adjacente. Les modifications de type III MODIC montrent un signal faible dans les séquences T1W et T2W. Des lésions sclérotiques correspondant aux plaques de fin ont été observées6. Le MC est considéré comme une maladie pathologique de la colonne vertébrale et est étroitement associé à de nombreuses maladies dégénératives de la colonne vertébrale7,8,9.
Compte tenu des données disponibles, plusieurs études ont fourni des informations détaillées sur l'étiologie et les mécanismes pathologiques du MC. Albert et al. a suggéré que MC peut être causé par la hernie discale8. Hu et al. MC attribué à la dégénérescence du disque sévère10. KROC a proposé le concept de «rupture interne du disque», qui indique que le traumatisme disque répétitif peut entraîner des microtears dans la plaque de fin. Après la formation de la fente, la destruction des plaques d'extrémité par le noyau pulpeux (NP) peut déclencher une réponse auto-immune, ce qui conduit encore au développement de MC11. Ma et al. a partagé une vision similaire et a rapporté que l'auto-immunité induite par le NP joue un rôle clé dans la pathogenèse de MC12.
Les cellules du système immunitaire, en particulier les lymphocytes CD4 + T auxiliaires, jouent un rôle essentiel dans la pathogenèse de l'autoimmunity13. Le sous-ensemble Th17 récemment découvert produit la cytokine pro-inflammatoire IL-17, favorise l'expression des chimiokines et stimule les cellules T chez les organes endommagés pour produire l'IFN-γ14. Les cellules Th2 jouent également un rôle unique dans la pathogenèse des réponses immunitaires. L'expression de l'IL-4 en tant que cellule TH2 représentative peut conduire à de graves conséquences immunopathologiques15.
Bien que de nombreuses études cliniques aient été menées sur MC16,17,18,19,20,21,22,23,24, il y a toujours un manque de modèles expérimentaux animaux appropriés qui peuvent imiter le processus MC qui se produit fréquemment chez l'homme et peut être Utilisé pour étudier l'étiologie ou les nouveaux traitements tels que la thérapie ciblée. À ce jour, seuls quelques modèles animaux de MC étudieraient les mécanismes pathologiques sous-jacents.
Sur la base de la théorie auto-immune proposée par Albert et MA, cette étude a établi un modèle de lapin MC simple et reproductible par NP de la plaque d'extrémité vertébrale percée. D'autres objectifs sont d'observer les caractéristiques histologiques des modèles animaux et d'évaluer les mécanismes spécifiques du NP dans le développement de MC. À cette fin, nous utilisons des techniques telles que la biologie moléculaire, l'IRM et les études histologiques pour étudier la progression de MC.
Deux lapins sont morts de saignement pendant la chirurgie et quatre lapins sont morts pendant l'anesthésie pendant l'IRM. Les 48 lapins restants ont survécu et n'ont montré aucun signe comportemental ou neurologique après la chirurgie.
L'IRM montre que l'intensité du signal du tissu intégré dans différents trous est différente. L'intensité du signal du corps vertébral L5 dans le groupe NPE a progressivement changé à 12, 16 et 20 semaines après l'insertion (la séquence T1W a montré un signal faible, et la séquence T2W a montré un signal mixte plus un signal faible) (Fig. 1C), tandis que les apparitions en IRM des deux autres groupes de pièces intégrées sont restées relativement stables au cours de la même période (Fig. 1A, B).
(A) IRM séquentiel représentatif de la colonne lombaire de lapin à 3 points de temps. Aucune anomalie de signal n'a été trouvée dans les images du groupe de ficture de l'opération. (B) Les caractéristiques du signal du corps vertébral dans le groupe ME sont similaires à celles du groupe d'opération simulées, et aucun changement de signal significatif n'est observé sur le site d'incorporation au fil du temps. (C) Dans le groupe NPE, le signal bas est clairement visible dans la séquence T1W, et le signal mixte et le signal faible sont clairement visibles dans la séquence T2W. De la période de 12 semaines à la période de 20 semaines, les signaux élevés sporadiques entourant les signaux faibles dans la séquence T2W diminuent.
Une hyperplasie osseuse évidente peut être observée au site d'implantation du corps vertébral dans le groupe NPE, et l'hyperplasie osseuse se produit plus rapidement de 12 à 20 semaines (figure 2C) par rapport au groupe NPE, aucun changement significatif n'est observé dans le vertébral modélisé corps; Groupe Sham et ME Group (Fig. 2c) 2a, b).
(A) La surface du corps vertébral à la partie implantée est très lisse, le trou guérisse bien et il n'y a pas d'hyperplasie dans le corps vertébral. (B) La forme du site implanté dans le groupe ME est similaire à celle du groupe d'opération Sham, et il n'y a pas de changement évident dans l'apparition du site implanté au fil du temps. (C) Une hyperplasie osseuse s'est produite sur le site implanté du groupe NPE. L'hyperplasie osseuse a augmenté rapidement et s'est même étendue à travers le disque intervertébral au corps vertébral controlatéral.
L'analyse histologique fournit des informations plus détaillées sur la formation osseuse. La figure 3 montre les photographies des sections postopératoires colorées avec H&E. Dans le groupe d'opération simulé, les chondrocytes ont été bien disposés et aucune prolifération cellulaire n'a été détectée (figure 3A). La situation dans le groupe ME était similaire à celle du groupe de simulation (Fig. 3B). Cependant, dans le groupe NPE, un grand nombre de chondrocytes et une prolifération des cellules de type NP ont été observés au site d'implantation (figure 3C);
(A) Les trabécules peuvent être observées près de la plaque d'extrémité, les chondrocytes sont soigneusement disposés avec une taille et une forme uniformes de cellule et aucune prolifération (40 fois). (B) L'état du site d'implantation dans le groupe ME est similaire à celui du groupe simulé. Les trabeccules et les chondrocytes peuvent être vus, mais il n'y a pas de prolifération évidente au site d'implantation (40 fois). (B) On peut voir que les chondrocytes et les cellules de type NP prolifèrent de manière significative et que la forme et la taille des chondrocytes sont inégales (40 fois).
L'expression de l'ARNm de l'interleukine 4 (IL-4), de l'ARNm de l'interleukine 17 (IL-17) et de l'ARNm d'interféron γ (IFN-γ) a été observée dans les groupes NPE et ME. Lorsque les niveaux d'expression des gènes cibles ont été comparés, les expressions de gènes d'IL-4, d'IL-17 et d'IFN-γ ont été significativement augmentées dans le groupe NPE par rapport à celles du groupe ME et du groupe d'opération de simulation (Fig. 4) (P <0,05). Par rapport au groupe d'opération de simulation, les niveaux d'expression d'IL-4, d'IL-17 et d'IFN-γ dans le groupe ME n'ont augmenté que légèrement et n'ont pas atteint un changement statistique (p> 0,05).
L'expression de l'ARNm de l'IL-4, de l'IL-17 et de l'IFN-γ dans le groupe NPE a montré une tendance significativement plus élevée que celles du groupe d'opération Sham et du groupe ME (P <0,05).
En revanche, les niveaux d'expression dans le groupe ME n'ont montré aucune différence significative (p> 0,05).
L'analyse Western blot a été réalisée en utilisant des anticorps disponibles dans le commerce contre IL-4 et IL-17 pour confirmer le modèle d'expression altéré de l'ARNm. Comme le montrent les figures 5A, B, par rapport au groupe ME et au groupe d'opération Sham, les niveaux de protéines d'IL-4 et d'IL-17 dans le groupe NPE ont été significativement augmentés (P <0,05). Par rapport au groupe d'opération Sham, les niveaux de protéines d'IL-4 et d'IL-17 dans le groupe ME n'ont pas non plus atteint des changements statistiquement significatifs (p> 0,05).
(A) Les niveaux de protéines d'IL-4 et d'IL-17 dans le groupe NPE étaient significativement plus élevés que ceux du groupe ME et du groupe placebo (P <0,05). (B) Histogramme Western blot.
En raison du nombre limité d'échantillons humains obtenus pendant la chirurgie, des études claires et détaillées sur la pathogenèse du MC sont quelque peu difficiles. Nous avons tenté d'établir un modèle animal de MC pour étudier ses mécanismes pathologiques potentiels. Dans le même temps, l'évaluation radiologique, l'évaluation histologique et l'évaluation biologique moléculaire ont été utilisées pour suivre le cours de MC induit par l'autogreffe NP. En conséquence, le modèle d'implantation NP a entraîné un changement progressif de l'intensité du signal de 12 semaines à 20 semaines (signal faible mixte dans les séquences T1W et un signal faible dans les séquences T2W), indiquant les changements tissulaires, et les histologiques et moléculaires histologiques et moléculaires Les évaluations biologiques ont confirmé les résultats de l'étude radiologique.
Les résultats de cette expérience montrent que des changements visuels et histologiques se sont produits sur le site de l'infraction du corps vertébral dans le groupe NPE. Dans le même temps, l'expression des gènes IL-4, IL-17 et IFN-γ, ainsi que IL-4, IL-17 et IFN-γ ont été observées, ce qui indique que l'infraction du tissu de noyau autologue pulpeux dans le vertébral Le corps peut provoquer une série de changements de signal et morphologiques. Il est facile de constater que les caractéristiques du signal des corps vertébraux du modèle animal (signal faible dans la séquence T1W, signal mixte et signal faible dans la séquence T2W) sont très similaires à ceux des cellules vertébrales humaines, et les caractéristiques IRM également Confirmez les observations de l'histologie et de l'anatomie brute, c'est-à-dire que les changements dans les cellules du corps vertébral sont progressives. Bien que la réponse inflammatoire causée par des traumatismes aigus puisse apparaître peu de temps après la perforation, les résultats de l'IRM ont montré que des changements de signal augmentant progressivement sont apparus 12 semaines après la perforation et ont persisté jusqu'à 20 semaines sans aucun signe de récupération ou d'inversion des changements d'IRM. Ces résultats suggèrent que le NP vertébral autologue est une méthode fiable pour établir un MV progressif chez les lapins.
Ce modèle de ponction nécessite des compétences, du temps et des efforts chirurgicaux adéquats. Dans des expériences préliminaires, la dissection ou la stimulation excessive des structures ligamentaires paravertébrales peuvent entraîner la formation d'ostéophytes vertébraux. Il faut prendre soin de ne pas endommager ou d'irriter les disques adjacents. Étant donné que la profondeur de pénétration doit être contrôlée pour obtenir des résultats cohérents et reproductibles, nous avons fait un bouchon manuellement en coupant la gaine d'une aiguille de 3 mm de long. L'utilisation de cette prise assure une profondeur de forage uniforme dans le corps vertébral. Dans des expériences préliminaires, trois chirurgiens orthopédistes impliqués dans l'opération ont trouvé des aiguilles de calibre 16 plus faciles à travailler avec des aiguilles de calibre 18 ou d'autres méthodes. Pour éviter des saignements excessifs pendant le forage, tenir l'aiguille encore pendant un certain temps fournira un trou d'insertion plus approprié, ce qui suggère qu'un certain degré de MC peut être contrôlé de cette manière.
Bien que de nombreuses études aient ciblé MC, on sait peu de choses sur l'étiologie et la pathogenèse du MC25,26,27. Sur la base de nos études précédentes, nous avons constaté que l'auto-immunité joue un rôle clé dans l'occurrence et le développement de MC12. Cette étude a examiné l'expression quantitative de l'IL-4, de l'IL-17 et de l'IFN-γ, qui sont les principales voies de différenciation des cellules CD4 + après stimulation de l'antigène. Dans notre étude, par rapport au groupe négatif, le groupe NPE avait une expression plus élevée d'IL-4, d'IL-17 et d'IFN-γ, et les niveaux de protéine d'IL-4 et IL-17 étaient également plus élevés.
Cliniquement, l'expression de l'ARNm de l'IL-17 est augmentée dans les cellules NP des patients atteints de hernie discale28. Une augmentation des niveaux d'expression d'IL-4 et d'IFN-γ a également été trouvée dans un modèle de hernie discale aiguë non compressif par rapport aux témoins sains29. L'IL-17 joue un rôle clé dans l'inflammation, les lésions tissulaires dans les maladies auto-immunes30 et améliore la réponse immunitaire à l'IFN-γ31. Des lésions tissulaires médiées par l'IL-17 ont été rapportées chez les souris MRL / LPR32 et les souris sensibles à l'auto-immunité33. L'IL-4 peut inhiber l'expression des cytokines pro-inflammatoires (telles que l'IL-1β et le TNFα) et l'activation des macrophages34. Il a été rapporté que l'expression de l'ARNm de l'IL-4 était différente dans le groupe NPE par rapport à l'IL-17 et IFN-γ au même moment; L'expression de l'ARNm de l'IFN-γ dans le groupe NPE était significativement plus élevée que celle des autres groupes. Par conséquent, la production d'IFN-γ peut être un médiateur de la réponse inflammatoire induite par l'intercalation NP. Des études ont montré que l'IFN-γ est produit par plusieurs types de cellules, y compris les cellules T desiliaires de type 1 activées, les cellules tueuses naturelles et les macrophages35,36, et est une cytokine pro-inflammatoire clé qui favorise les réponses immunitaires37.
Cette étude suggère que la réponse auto-immune peut être impliquée dans l'occurrence et le développement de MC. Luoma et al. ont constaté que les caractéristiques du signal de MC et de NP proéminents sont similaires sur l'IRM, et les deux présentent un signal élevé dans la séquence T2W38. Certaines cytokines ont été confirmées comme étant étroitement associées à la survenue de MC, comme l'IL-139. Ma et al. a suggéré que la saillie ascendante ou vers le bas du NP peut avoir une grande influence sur l'occurrence et le développement de MC12. Bobechko40 et Herzbein et al.41 ont rapporté que NP est un tissu immunotolérant qui ne peut pas entrer dans la circulation vasculaire de la naissance. Les protubérances NP introduisent les corps étrangers dans l'approvisionnement en sang, médiant ainsi les réactions auto-immunes locales42. Les réactions auto-immunes peuvent induire un grand nombre de facteurs immunitaires et lorsque ces facteurs sont exposés en permanence aux tissus, ils peuvent provoquer des changements dans la signalisation43. Dans cette étude, la surexpression de l'IL-4, de l'IL-17 et de l'IFN-γ est des facteurs immunitaires typiques, prouvant en outre la relation étroite entre NP et MCS44. Ce modèle animal imite bien la percée NP et l'entrée dans la plaque d'extrémité. Ce processus a en outre révélé l'impact de l'auto-immunité sur MC.
Comme prévu, ce modèle animal nous fournit une plate-forme possible pour étudier le MC. Cependant, ce modèle a encore certaines limites: premièrement, pendant la phase d'observation animale, certains lapins à un stade intermédiaire doivent être euthanasiés pour des tests de biologie histologique et moléculaire, de sorte que certains animaux «tombent en désaccord» au fil du temps. Deuxièmement, bien que trois points dans le temps soient fixés dans cette étude, malheureusement, nous n'avons modélisé qu'un seul type de MC (Modic Type I Change), il ne suffit donc pas de représenter le processus de développement des maladies humaines, et plus de points dans le temps doivent être définis pour Mieux vaut observer tous les changements de signal. Troisièmement, les changements dans la structure des tissus peuvent en effet être clairement montrés par coloration histologique, mais certaines techniques spécialisées peuvent mieux révéler les changements microstructuraux dans ce modèle. Par exemple, la microscopie optique polarisée a été utilisée pour analyser la formation de fibrocartilage dans les disques intervertébraux de lapin45. Les effets à long terme du NP sur MC et la plaque d'extrémité nécessitent une étude plus approfondie.
Cinquante-quatre lapins blancs masculins néo-zélandais (poids d'environ 2,5 à 3 kg, âgés de 3 à 3,5 mois) ont été divisés au hasard en groupe de fonctionnement factice, groupe d'implantation musculaire (groupe ME) et groupe d'implantation racinaire nerveux (groupe NPE). Toutes les procédures expérimentales ont été approuvées par le comité d'éthique de l'hôpital de Tianjin, et les méthodes expérimentales ont été réalisées en stricte avec les directives approuvées.
Certaines améliorations ont été apportées à la technique chirurgicale de S. Sobajima 46. Chaque lapin a été placé dans une position de recompenance latérale et la surface antérieure de cinq disques intervertébraux lombaires consécutifs (IVD) a été exposé en utilisant une approche rétropéritonéale postérolatérale. Chaque lapin a reçu une anesthésie générale (20% d'uréthane, 5 ml / kg via la veine de l'oreille). Une incision cutanée longitudinale a été pratiquée à partir du bord inférieur des côtes au bord pelvien, 2 cm ventral aux muscles paravertébraux. La colonne vertébrale antérolatérale droite de L1 à L6 a été exposée par une dissection nette et émoussée du tissu sous-cutané sus-jacent, du tissu rétropéritonéal et des muscles (Fig. 6A). Le niveau du disque a été déterminé en utilisant le bord pelvien comme monument anatomique pour le niveau du disque L5-L6. Utilisez une aiguille de ponction de calibre 16 pour percer un trou près de la plaque d'extrémité de la vertèbre L5 à une profondeur de 3 mm (Fig. 6B). Utilisez une seringue de 5 ml pour aspirer le noyau autologue pulpeux dans le disque intervertébral L1-L2 (Fig. 6C). Retirez le noyau pulpeux ou muscle en fonction des exigences de chaque groupe. Une fois le trou de forage approfondi, des sutures absorbables sont placées sur le fascia profond, le fascia et la peau superficiels, en prenant soin de ne pas endommager le tissu périosté du corps vertébral pendant la chirurgie.
(A) Le disque L5 - L6 est exposé via une approche rétropéritonéale postéro-latérale. (B) Utilisez une aiguille de calibre 16 pour percer un trou près de la plaque d'extrémité L5. (C) Les MF autologues sont récoltés.
L'anesthésie générale a été administrée avec 20% d'uréthane (5 ml / kg) administrée via la veine de l'oreille, et les radiographies de la colonne lombaire ont été répétées à 12, 16 et 20 semaines postopératoires.
Les lapins ont été sacrifiés par injection intramusculaire de kétamine (25,0 mg / kg) et de pentobarbital de sodium intraveineux (1,2 g / kg) à 12, 16 et 20 semaines après la chirurgie. La colonne vertébrale entière a été supprimée pour une analyse histologique et une analyse réelle a été réalisée. La transcription inverse quantitative (RT-QPCR) et le Western blot ont été utilisées pour détecter les changements dans les facteurs immunitaires.
Des examens d'IRM ont été effectués chez des lapins à l'aide d'un aimant clinique de 3,0 T (GE Medical Systems, Florence, SC) équipé d'un récepteur de bobine de membre orthogonal. Les lapins ont été anesthésiés avec 20% d'uréthane (5 ml / kg) via la veine de l'oreille, puis placés en décubitus dorsal dans l'aimant avec la région lombaire centrée sur une bobine de surface circulaire de 5 pouces de diamètre (GE Medical Systems). Des images de localisateur pondérées en T2 coronal (TR, 1445 ms; TE, 37 ms) ont été acquises pour définir l'emplacement du disque lombaire de L3 - L4 à L5 - L6. Des tranches pondérées en T2 du plan sagittal ont été acquises avec les paramètres suivants: séquence d'écho à spin rapide avec un temps de répétition (TR) de 2200 ms et un temps d'écho (TE) de 70 ms, matrice; champ visuel de 260 et huit stimuli; L'épaisseur de coupe était de 2 mm, l'espace était de 0,2 mm.
Une fois la dernière photo prise et que le dernier lapin a été tué, le simulacre, enlacés par les muscles et les disques NP ont été supprimés pour un examen histologique. Les tissus ont été fixés dans du formol tamponné neutre à 10% pendant 1 semaine, décalcifiés avec de l'acide éthylènediaminetraacétique et sectionné de paraffine. Les blocs de tissu ont été intégrés dans de la paraffine et coupés en coupes sagittales (5 μm d'épaisseur) à l'aide d'un microtome. Les coupes ont été colorées avec de l'hématoxyline et de l'éosine (H&E).
Après avoir collecté les disques intervertébraux des lapins dans chaque groupe, l'ARN total a été extrait à l'aide d'une colonne UNIQ-10 (Shanghai Sangon Biotechnology Co., Ltd., Chine) selon les instructions du fabricant et un système de transcription inverse II II (Promega Inc. , Madison, WI, USA). La transcription inverse a été effectuée.
RT-QPCR a été réalisé à l'aide d'un PRISM 7300 (Applied Biosystems Inc., USA) et de SYBR Green Start Taq Readymix (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) selon les instructions du fabricant. Le volume de réaction de PCR était de 20 μL et contenait 1,5 μL d'ADNc dilué et 0,2 μm de chaque amorce. Les amorces ont été conçues par Oligoperfect Designer (Invitrogen, Valence, CA) et fabriqués par Nanjing Golden Stewart Biotechnology Co., Ltd. (Chine) (tableau 1). Les conditions de cycle thermique suivantes ont été utilisées: étape d'activation initiale de la polymérase à 94 ° C pendant 2 min, puis 40 cycles de 15 s chacune à 94 ° C pour la dénaturation de la matrice, recuit pendant 1 min à 60 ° C, extension et fluorescence. Des mesures ont été effectuées pendant 1 min à 72 ° C. Tous les échantillons ont été amplifiés trois fois et la valeur moyenne a été utilisée pour l'analyse RT-QPCR. Les données d'amplification ont été analysées à l'aide de FlexStation 3 (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, USA). L'expression du gène IL-4, IL-17 et IFN-γ a été normalisée au contrôle endogène (ACTB). Les niveaux d'expression relatifs de l'ARNm cible ont été calculés en utilisant la méthode 2-ΔΔCT.
La protéine totale a été extraite des tissus à l'aide d'un homogénéisateur tissulaire dans le tampon de lyse Ripa (contenant un cocktail inhibiteur de la protéase et de la phosphatase) puis centrifugé à 13 000 tr / min pendant 20 min à 4 ° C pour éliminer les débris tissulaires. Cinquante microgrammes de protéines ont été chargés par voie, séparés par 10% SDS-PAGE, puis transférés dans une membrane PVDF. Le blocage a été effectué dans du lait sec non gras à 5% dans une solution saline tamponnée à Tris (TBS) contenant 0,1% de Tween 20 pendant 1 h à température ambiante. La membrane a été incubée avec un anticorps primaire antidéorine de lapin (dilué 1: 200; Boster, Wuhan, Chine) (dilué 1: 200; Bioss, Pékin, Chine) pendant une nuit à 4 ° C et réactivement les seconds jours; Avec un anticorps secondaire (l'immunoglobuline G de la chèvre anti-lapin à 1: 40 000 dilution) combinée à la peroxydase de raifort (Boster, Wuhan, Chine) pendant 1 heure à température ambiante. Des signaux Western blot ont été détectés par une chimiluminescence accrue sur la membrane chimiluminescente après irradiation des rayons X. Pour l'analyse densitométrique, les transferts ont été numérisés et quantifiés à l'aide d'un logiciel de bande et les résultats ont été exprimés comme le rapport de l'immunoréactivité du gène cible à l'immunoréactivité de la tubuline.
Des calculs statistiques ont été effectués à l'aide du progiciel SPSS16.0 (SPSS, USA). Les données recueillies au cours de l'étude ont été exprimées en moyenne ± écart-type (moyenne ± ET) et analysées en utilisant l'analyse des mesures répétées à sens unique (ANOVA) pour déterminer les différences entre les deux groupes. P <0,05 a été considéré comme statistiquement significatif.
Ainsi, l'établissement d'un modèle animal de MC en implantant des NP autologues dans le corps vertébral et en effectuant une observation macroanatomique, une analyse IRM, une évaluation histologique et une analyse biologique moléculaire peut devenir un outil important pour évaluer et comprendre les mécanismes de MC humain et développer de nouveaux thérapeutiques interventions.
Comment citer cet article: Han, C. et al. Un modèle animal de changements modes a été établi en implantant un noyau autologue pulpeux dans l'os sous-chondral de la colonne lombaire. Sci. Rep. 6, 35102: 10.1038 / srep35102 (2016).
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